【重磅】人用和兽用噬菌体治疗活性物质和药品写入药典

前言

2021年6月，欧洲药典委员会（EPC）在其第170届会议上同意制定一个新的通则（general chapter）章节——人用和兽用噬菌体治疗活性物质和药品（5.31），并将这一任务分配给新成立的噬菌体工作组（BACT WP）。现该章节草案已经拟定，正面向欧洲公众开放征询意见（截至6月底）。这是噬菌体治疗活性物质/药品写入药典。本文为该通则的中文翻译版。

1-1. 定义 DEFINITION

噬菌体是感染细菌并依赖其细菌宿主进行复制的病毒。噬菌体由单链或双链DNA或RNA组成的基因组和外层包裹的蛋白质衣壳组成。噬菌体治疗医药产品（Phage therapy medicinal products，PTMPs）是天然存在或基因修饰的噬菌体的制剂，用于治疗人类或动物细菌感染或其他医学病症。PTMP可含有一种噬菌体治疗活性物质，或噬菌体混合物，或与赋形剂结合。PTMPs可以通过多种途径给药，可赋予不同剂型。

1-2. 生产 PRODUCTION

噬菌体通过在细菌宿主菌株中繁殖获得，并使用合适的方法纯化。生产过程需产生一致质量和稳定的PTMP。在相关的时间点和/或生产过程中的关键中间阶段实施合适的过程内检测。PTMPs的生产是基于一个合格的种子批系统，该系统使用已被验证适合的宿主-噬菌体组合。

2-1. 一般规定 

噬菌体通过在细菌宿主菌株中繁殖获得，并使用合适的方法纯化。

生产过程需产生一致质量和稳定的PTMP。在相关的时间点和/或生产过程中的关键中间阶段实施合适的过程内检测。

PTMPs的生产是基于一个合格的种子批系统，该系统使用已被验证适合的宿主-噬菌体组合。

2-2. 细菌主细胞库和工作细胞库

用于PTMP生产的细菌宿主细胞必须在菌株水平上详细表征，包括菌株来源，随后的操作和用于鉴定菌株表征的测试。

用于PTMP生产的细菌细胞来源于合格的细菌主细胞库（Master Cell Bank），必须为单克隆来源并符合以下要求: 

微生物纯度：通过铺板或其他合适的方法来确定是否存在微生物污染物。

鉴定：该细菌菌株通过合适的表型和基因型方法进行表征，优选全基因组测序、生化或分子基因测试或质谱分析。该分型须包括抗生素敏感性谱及其染色体和质粒的核苷酸序列。在PTMP生产中避免使用编码污染源（如原噬菌体）或其他有害因素（如抗生素耐药性决定因素、毒素）的菌株，除非另有正当理由和授权。

细胞活力：活细胞的数量由平板计数或其他合适的活细胞计数方法确定。

噬菌体敏感性：菌株对噬菌体治疗活性物质的敏感性用噬菌斑试验或其他合适的方法来证明。

无不利噬菌体：证实没有可能对PTMPs不利的噬菌体（如溶原性噬菌体）。

用于生产的工作细胞库（Working Cell Bank）是主细胞库的克隆衍生物，符合活力、微生物纯度和噬菌体敏感性的要求。

2-3. 用于生产PTMPs的噬菌体

PTMP生产中使用的噬菌体须详细表征。需提供有关噬菌体来源、核苷酸序列和易感细菌种类的信息。避免使用编码已知或潜在有害遗传因素的噬菌体，如抗生素耐药性决定因素、毒素、溶原性模块或其他元素，除非另有正当理由和授权。

只有符合以下要求的主噬菌体库（Master Phage Banks）才能用于生产：

鉴定：噬菌体通过合适的表型和基因型方法进行鉴定，包括噬菌斑形态和全基因组测序。对于基因或化学修饰的噬菌体，修饰及其效果必须具体描述和鉴定。

噬菌体纯度：通过反复的噬菌斑纯化来纯化噬菌体，直到获得均一噬菌斑形态的噬菌体裂解液，其中包含一株噬菌体的克隆。

效价：感染性噬菌体滴度通过噬菌斑试验或其他合适的方法确定。

无菌（2.6.1）：需符合无菌检验。

用于生产的工作噬菌体库是主噬菌体库的克隆衍生物，需符合噬菌体纯度、无菌性和效价要求。

2-4. 生产和纯化 

PTMPs的生产基于种子批系统（seed-lot system），不同噬菌体和细菌宿主菌株之间的交叉污染需严格避免。

采用药用级别原料。生物原料也需符合通则5.2.12（用于生产细胞基因治疗药品的生物原料）的要求。

噬菌体通过合适的技术纯化。

同一噬菌体克隆的几个单次收获物可能在纯化过程之前合并。

只有符合以下要求的纯化后收获物才能用于制备成品批（Final Lot）：

鉴定：使用相关的基因型和表型标记物来确认每种噬菌体。

效价：感染性噬菌体滴度通过空斑试验或其他合适的方法确定。

微生物学检查（2.6.12）：符合既定的规范。

残留试剂：在风险分析的基础上，对纯化的收获物进行生产过程中使用的试剂残留和安全风险的测试。

宿主细胞杂质和污染物：来自宿主细胞的污染物和其他潜在有毒物质（如内毒素和外毒素、宿主细胞蛋白质、宿主细胞DNA）不存在或在特定制剂批准的限度内。

2-5. 成品批 

成品批（Final Lot）可以配制成几种不同的剂型：固体（如片剂）、液体（如注射或口服）或冻干制剂。

成品批符合以下要求：

外观：符合既定规范。

鉴定：使用相关的基因型和表型标记物来确认噬菌体的身份。

效价：每个噬菌体的感染性效价，以PFU/mL或PFU/mg表示，通过噬菌斑试验或其他合适的方法确定，并且在特定制剂批准的范围内。

无菌（2.6.1）：对于无菌PTMPs，符合无菌检验。

微生物学质量：对于非无菌PTMPs，通则5.1.4（医药用非无菌制剂和物质的微生物学质量）章提供了建议。

热原性 [1] (5.1.13)：特定制剂，如果适用的话应符合合适的热原性检测。

冻干PTMPs还需符合以下附加要求：

含水量 (2.5.12或2.5.32)：符合特定产品批准的限制。

液态PTMPs还需符合以下附加要求：

pH (2.2.3)：符合特定产品批准的限制。

2-6. 适应性产品 

噬菌体适应（Adaption）是指PTMP可以定向进化以增加其对个体患者临床分离细菌株的效力的过程。噬菌体适应所用单个噬菌体或噬菌体组合符合第2-3节规定。成品批的适应性PTMP的效价使用目标临床分离菌株来检测。成品批符合第2-5节外观、无菌（或微生物污染）和热原性的规定，除非另有正当理由和授权。

3-1. 标签 LABELLING

适用相关超国家（supernational）和国家法规中概述的标签要求。

[1] 药典35.1纳入一章新通则——热原性（5.1.13），提供了热原检测方法选择的指导。